对实验结果进行观察统计时,不需要将膜取下,也不需要将另一边的细胞擦掉(经常将膜擦破,导致实验失败),可直接将μ-Slide放于显微镜下观察统计。
图1. ibipore及ibipore SiN氮化硅膜培养细胞的染色结果。
图片背景为在ibipore氮化硅膜上培养细胞的荧光染色结果,规则排布的白色圆点为氮化硅膜的孔隙
①. ibipore可以在上下两个通道中培养细胞,这样做才能够观察细胞向上的侵袭情况,排除以往实验中重力作用的影响;②. ibipore中间的氮化硅膜拥有非常良好的光学特性,可以实时成像观察侵袭情况,也能够直接进行免疫荧光染色实验;
③. ibipore能配合ibidi流体剪切力系统,观察淋巴细胞等在流动状态下的侵袭情况。
* 透过薄而多孔的薄膜获得卓越的光学性能* 存在广泛的应用,细胞可完全粘附到顶部-基底
由插入两个通道之间的水平多孔膜组成。上部通道是膜上方的静态储液池。下部通道是灌注通道,用于对附着在膜上的细胞施加限定的剪切应力。上部通道和下部通道仅通过隔膜彼此连通。
多孔膜由氮化硅(SiN)制成,这样一种材料具有非常高的化学和机械稳健性。400nm厚的氮化硅膜很适合成像和显微镜观察,没有一点自发荧光或透明度问题(如玻璃)。SiN材料可以直接用于贴壁细胞培养,也可以再一次进行选择用ECM蛋白包被。
孔密度是指膜的空隙体积分数。是孔隙的体积除以膜的总体积。下面的图形为采用相同的放大倍数。
不同应用的建议孔径:不同的细胞大小和直径不同,根据具体实验请选择不同孔径
Co-Culture and Cell Barrier Assay共培养和细胞屏障分析
在膜的两侧分别培养单层细胞。通过这种办法能够进行信号传递、共培养以及迁移实验(例如,分析药物通过上皮或内皮屏障的传递)。
Apical-Basal Cell Polarity Assays顶端-?基底端细胞极性分析
以下示例将讲述该产品进一步的潜在应用。ibidi仍需在内部测试这些应用,因此我们没办法提供特定的实验方案。但是,从技术角度来看,这些应用应该是可行的。
在膜的一侧培养单层细胞。可以观察悬浮的白细胞在流动状态下的滚动、粘附以及侵袭情况。
Cell Transport in a 3D Gel Matrix细胞在3D凝胶基质中的传递
3D凝胶基质中的细胞迁移:在流动状态下,观察白细胞的滚动、粘附以及向3D凝胶基质中肿瘤细胞方向的迁移情况。
,孔径0.5μm的玻片中,无蛋白质包被。接种后,将细胞在静态条件下在培养箱中保持20小时。相差显微镜,4倍物镜。请注意,这张图像中的中心多孔区域看起来更暗,因为0.5μm的孔隙无法用低分辨率物镜分辨。
,孔径3μm的玻片中,有纤连蛋白包被。将细胞接种并在具有ibidi泵系统/流体剪切力系统的流动条件(10达因/cm2)下在培养箱中保持12小时。固定后的相位对比显微镜,10倍物镜。
人脐静脉上皮细胞(HUVEC)在μ-Slide ibiPore SiN,孔径5μm玻片中的免疫荧光染色,有纤连蛋白包被。将细胞接种并在具有
的流动条件(10达因/cm2)下在培养箱中保持12小时。绿色:肌动蛋白(鬼笔肽),蓝色:细胞核(DAPI)。荧光显微镜,20倍物镜。
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